胚胎活檢完成后，獲取的少量細(xì)胞樣本（通常僅 3-10 個細(xì)胞）需經(jīng)過保存、轉(zhuǎn)運(yùn)、全基因組擴(kuò)增（WGA）等多環(huán)節(jié)處理，才能進(jìn)入后續(xù) PGT 檢測流程。很多人關(guān)注活檢操作本身的影響，卻容易忽視這些 “后續(xù)環(huán)節(jié)”—— 若樣本處理不當(dāng)，是否會導(dǎo)致 PGT 檢測結(jié)果偏離胚胎真實(shí)遺傳狀態(tài)？答案是肯定的。從樣本離體后的保存條件，到轉(zhuǎn)運(yùn)過程中的環(huán)境控制，再到實(shí)驗室擴(kuò)增技術(shù)的穩(wěn)定性，每一步都可能成為影響檢測準(zhǔn)確性的 “隱形變量”，需要逐一拆解其潛在風(fēng)險與應(yīng)對方案。

首先看樣本保存環(huán)節(jié)的影響?；顧z獲取的細(xì)胞樣本離體后，若不能及時進(jìn)入檢測流程，需在專用保存液中暫存，保存液的成分、溫度及保存時間，直接決定細(xì)胞活性與 DNA 穩(wěn)定性。目前臨床常用的保存液分為 “常溫保存液”（20-25℃）和 “低溫保存液”（4-8℃），前者適合短時間保存（≤2 小時），后者可延長至 4-6 小時。若保存液成分失衡，如 EDTA（防止 DNA 降解的成分）濃度過低（低于 0.5 mmol/L），會導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)核酸酶激活，約 15%-20% 的樣本會出現(xiàn) DNA 片段化，片段化的 DNA 在后續(xù)擴(kuò)增中易產(chǎn)生 “非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物”，使 PGT-A 檢測出現(xiàn)假陽性（如誤判染色體微缺失），發(fā)生率約 6%-8%。

溫度波動是保存環(huán)節(jié)的另一大風(fēng)險。常溫保存時，若環(huán)境溫度超過 28℃，細(xì)胞代謝速率加快，ATP 消耗增加，可能導(dǎo)致 DNA 復(fù)制酶活性下降，進(jìn)而影響后續(xù) WGA 效率；低溫保存時，若溫度低于 2℃，會引發(fā)細(xì)胞內(nèi)水分結(jié)冰，形成的冰晶會刺破細(xì)胞膜，約 10%-12% 的樣本會因此出現(xiàn)細(xì)胞破裂，DNA 釋放到保存液中，導(dǎo)致樣本 DNA 濃度降低，若濃度低于 10 pg/μL，會使 WGA 失敗率提升 25%-30%，直接導(dǎo)致 PGT 檢測無法進(jìn)行。此外，保存時間過長也會增加風(fēng)險 —— 常溫保存超過 4 小時，樣本 DNA 降解率可達(dá) 30% 以上，即使后續(xù)完成擴(kuò)增，檢測結(jié)果的信噪比也會顯著下降，可能掩蓋真實(shí)的染色體異常信號，造成假陰性。

再看樣本轉(zhuǎn)運(yùn)環(huán)節(jié)的潛在問題。若活檢與檢測不在同一實(shí)驗室進(jìn)行，樣本需通過專用轉(zhuǎn)運(yùn)箱轉(zhuǎn)運(yùn)，轉(zhuǎn)運(yùn)過程中的震動、溫度變化及污染風(fēng)險，均可能影響樣本質(zhì)量。震動強(qiáng)度超過 50 Hz 時，會導(dǎo)致保存液劇烈晃動，可能使細(xì)胞與保存液中的雜質(zhì)（如容器壁脫落物）充分接觸，約 8%-10% 的樣本會因此出現(xiàn)雜質(zhì)污染，若雜質(zhì)中含有外源 DNA（如細(xì)菌、真菌或其他胚胎細(xì)胞），會在后續(xù)擴(kuò)增中被同步放大，導(dǎo)致檢測結(jié)果出現(xiàn) “雜合信號”，例如在 PGT-M 檢測中，可能誤判胚胎同時攜帶正?；蚺c致病基因，造成檢測結(jié)果模糊。

溫度控制是轉(zhuǎn)運(yùn)環(huán)節(jié)的核心難點(diǎn)。即使使用恒溫轉(zhuǎn)運(yùn)箱，若箱內(nèi)溫度波動超過 ±2℃（如夏季高溫或冬季低溫環(huán)境下），會導(dǎo)致樣本細(xì)胞出現(xiàn) “應(yīng)激反應(yīng)”，研究顯示，溫度波動超過 3℃時，細(xì)胞內(nèi)應(yīng)激基因（如 HSP70）表達(dá)會升高 2 倍以上，可能引發(fā) DNA 甲基化模式改變，這種表觀遺傳變化雖不影響染色體數(shù)目檢測，但會對單基因疾病的精準(zhǔn)檢測（如需要區(qū)分甲基化位點(diǎn)的檢測項目）產(chǎn)生干擾，假陽性率可能升高 4%-5%。此外，轉(zhuǎn)運(yùn)時間過長（超過 6 小時）會增加樣本暴露于外界環(huán)境的風(fēng)險，若轉(zhuǎn)運(yùn)箱密封性不佳，可能導(dǎo)致灰塵、微生物進(jìn)入，進(jìn)一步增加污染概率。

全基因組擴(kuò)增（WGA）作為活檢樣本處理的關(guān)鍵步驟，其技術(shù)穩(wěn)定性直接決定 PGT 檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。WGA 的核心目的是將少量細(xì)胞的 DNA 擴(kuò)增至滿足檢測需求的量（通常需 1-2 μg），但擴(kuò)增過程中可能出現(xiàn) “擴(kuò)增偏倚”—— 即不同區(qū)域的 DNA 擴(kuò)增效率不同，若某一染色體片段擴(kuò)增效率過低（低于正常水平的 50%），會導(dǎo)致該片段在檢測中被誤判為 “缺失”，造成 PGT-A 檢測假陽性；若擴(kuò)增效率過高（超過正常水平的 2 倍），則可能被誤判為 “重復(fù)”，假陽性率約 5%-7%。此外，WGA 過程中若出現(xiàn) “等位基因脫扣”（ADO），即某一等位基因未被擴(kuò)增，會導(dǎo)致 PGT-M 檢測出現(xiàn)假陰性，例如胚胎實(shí)際攜帶致病基因，但因該基因未被擴(kuò)增，檢測結(jié)果顯示為正常，ADO 發(fā)生率約 3%-6%，且與樣本細(xì)胞數(shù)量呈負(fù)相關(guān)（細(xì)胞數(shù)量越少，ADO 風(fēng)險越高）。

WGA 環(huán)節(jié)的污染風(fēng)險也不容忽視。實(shí)驗室環(huán)境中的外源 DNA（如操作人員的皮膚細(xì)胞、既往檢測樣本的殘留 DNA）若進(jìn)入擴(kuò)增體系，會被同步放大，約 10%-12% 的污染樣本會出現(xiàn) “混合基因型”，導(dǎo)致檢測結(jié)果無法準(zhǔn)確判斷胚胎的真實(shí)遺傳狀態(tài)。例如，外源 DNA 攜帶某一染色體異常，會使原本正常的胚胎樣本被誤判為異常，造成假陽性。此外，擴(kuò)增試劑的質(zhì)量也會影響結(jié)果 —— 若試劑中存在 DNA 酶污染，會導(dǎo)致樣本 DNA 在擴(kuò)增前被降解，約 5%-8% 的樣本會因此出現(xiàn)擴(kuò)增失敗，需重新獲取樣本，而重復(fù)活檢會進(jìn)一步增加胚胎損傷風(fēng)險。

針對這些環(huán)節(jié)的風(fēng)險，臨床已建立多維度質(zhì)控體系。在樣本保存方面，采用 “成分精準(zhǔn)配比” 的專用保存液（EDTA 濃度控制在 1-2 mmol/L），并通過實(shí)時溫度監(jiān)控儀確保保存溫度波動不超過 ±1℃，同時規(guī)定常溫保存不超過 2 小時、低溫保存不超過 6 小時；在轉(zhuǎn)運(yùn)環(huán)節(jié)，使用防震（震動強(qiáng)度≤30 Hz）、恒溫（4-25℃可調(diào)）的專用轉(zhuǎn)運(yùn)箱，配備雙重密封裝置，轉(zhuǎn)運(yùn)時間嚴(yán)格控制在 8 小時內(nèi)，且每批次轉(zhuǎn)運(yùn)樣本均需附帶 “溫度 - 震動記錄報告”，不合格樣本直接剔除；在 WGA 環(huán)節(jié)，采用 “多重質(zhì)控” 方案 —— 擴(kuò)增前檢測樣本 DNA 濃度與純度，擴(kuò)增后通過瓊脂糖凝膠電泳驗證擴(kuò)增產(chǎn)物質(zhì)量，同時設(shè)置空白對照（僅含試劑不含樣本）與陽性對照（已知基因型的標(biāo)準(zhǔn) DNA），若對照出現(xiàn)異常，立即重新進(jìn)行擴(kuò)增，可使 WGA 失敗率降低至 5% 以下，擴(kuò)增偏倚發(fā)生率控制在 3% 以內(nèi)。

活檢后的樣本處理環(huán)節(jié)雖不直接涉及胚胎操作，卻是連接活檢與 PGT 檢測的關(guān)鍵橋梁，任何一步處理不當(dāng)，都可能導(dǎo)致檢測結(jié)果 “失準(zhǔn)”。但通過標(biāo)準(zhǔn)化的保存條件、嚴(yán)格的轉(zhuǎn)運(yùn)控制及精準(zhǔn)的 WGA 質(zhì)控，可將這些風(fēng)險降至最低。未來，隨著微流控芯片技術(shù)的發(fā)展（如將樣本保存、轉(zhuǎn)運(yùn)、擴(kuò)增集成于芯片內(nèi)，減少外界干擾），樣本處理的穩(wěn)定性將進(jìn)一步提升，為 PGT 檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性提供更堅實(shí)的保障。在當(dāng)前技術(shù)階段，選擇具備完善樣本處理質(zhì)控體系的實(shí)驗室，是確保 PGT 檢測結(jié)果可靠的重要前提，而非單純依賴活檢技術(shù)本身的先進(jìn)性。

免責(zé)聲明：本頁面信息為第三方發(fā)布或內(nèi)容轉(zhuǎn)載，僅出于信息傳遞目的，其作者觀點(diǎn)、內(nèi)容描述及原創(chuàng)度、真實(shí)性、完整性、時效性本平不作任何保證或承諾，涉及用藥、治療等問題需謹(jǐn)遵醫(yī)囑！請讀者僅作參考，并自行核實(shí)相關(guān)內(nèi)容。如有作品內(nèi)容、知識產(chǎn)權(quán)或其它問題，請發(fā)郵件至及時聯(lián)系我們處理！