在胚胎植入前遺傳學(xué)檢測(cè)（PGT）流程中，胚胎活檢的 “取樣” 環(huán)節(jié)如同為檢測(cè)提供 “原材料”，而取樣時(shí)機(jī)（卵裂期 vs 囊胚期）和取樣細(xì)胞數(shù)量的選擇，直接關(guān)系到 “原材料” 的質(zhì)量與代表性。不少人疑惑，這兩個(gè)看似基礎(chǔ)的操作細(xì)節(jié)，是否真的會(huì)對(duì)最終 PGT 檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響？要解答這個(gè)問(wèn)題，需要從胚胎發(fā)育規(guī)律、檢測(cè)技術(shù)原理以及臨床數(shù)據(jù)反饋三個(gè)維度展開(kāi)分析。

先看取樣時(shí)機(jī)的差異。卵裂期活檢通常在胚胎發(fā)育第 3 天進(jìn)行，此時(shí)胚胎處于 8-10 細(xì)胞階段，操作時(shí)會(huì)抽取 1-2 個(gè)卵裂球。從技術(shù)層面看，卵裂期胚胎結(jié)構(gòu)相對(duì)簡(jiǎn)單，透明帶較薄，活檢操作耗時(shí)較短（通常 2-3 分鐘），對(duì)胚胎體外暴露時(shí)間的影響較小。但卵裂期細(xì)胞存在明顯局限性 —— 此時(shí)細(xì)胞尚未完全分化，且部分胚胎可能出現(xiàn) “碎片化” 現(xiàn)象，即細(xì)胞裂解產(chǎn)生的碎片與正常卵裂球混雜。有研究顯示，約 15%-20% 的卵裂期胚胎碎片比例超過(guò) 20%，若活檢時(shí)誤將碎片當(dāng)作細(xì)胞取樣，會(huì)導(dǎo)致有效檢測(cè)樣本不足，進(jìn)而出現(xiàn)假陰性結(jié)果（即胚胎實(shí)際存在異常但未檢出）。此外，卵裂期胚胎的染色體穩(wěn)定性較差，約 30% 的卵裂球會(huì)出現(xiàn)隨機(jī)染色體異常（如單體、三體），這種 “隨機(jī)異?！?并非胚胎整體遺傳狀態(tài)的體現(xiàn)，若恰好取到這類異常細(xì)胞，會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果與胚胎真實(shí)情況不符。

相比之下，囊胚期活檢（胚胎發(fā)育第 5-7 天）選擇從滋養(yǎng)外胚層抽取 3-10 個(gè)細(xì)胞，這一階段的胚胎已分化為內(nèi)細(xì)胞團(tuán)（將來(lái)發(fā)育為胎兒）和滋養(yǎng)外胚層（將來(lái)發(fā)育為胎盤），取樣不影響內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，理論上更安全。同時(shí)，囊胚期胚胎染色體異常比例相對(duì)穩(wěn)定，約 40%-50% 的囊胚存在染色體異常，且多為整體異常而非隨機(jī)異常，取樣代表性更強(qiáng)。但囊胚期活檢也有短板：若胚胎發(fā)育緩慢，未形成明顯囊胚腔或滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞數(shù)量不足，會(huì)增加活檢難度。臨床數(shù)據(jù)顯示，約 8%-12% 的胚胎因囊胚質(zhì)量不佳無(wú)法進(jìn)行活檢，只能放棄檢測(cè)，這在一定程度上減少了可篩選的胚胎數(shù)量。此外，囊胚期活檢操作時(shí)間更長(zhǎng)（約 4-6 分鐘），胚胎在體外環(huán)境暴露時(shí)間增加，可能導(dǎo)致培養(yǎng)基成分波動(dòng)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生影響，如 pH 值變化可能引發(fā)細(xì)胞內(nèi) DNA 甲基化水平輕微改變，雖不直接影響染色體數(shù)目檢測(cè)，但可能對(duì)單基因疾病的 PGT 檢測(cè)（需精準(zhǔn)分析基因序列）產(chǎn)生潛在干擾。

再看取樣細(xì)胞數(shù)量的影響。對(duì)卵裂期胚胎而言，取樣 1 個(gè)細(xì)胞和 2 個(gè)細(xì)胞的檢測(cè)準(zhǔn)確性存在明顯差異。若僅取 1 個(gè)細(xì)胞，若該細(xì)胞恰好存在隨機(jī)染色體異常（如偶發(fā)的 21 號(hào)染色體三體），檢測(cè)結(jié)果會(huì)誤判胚胎整體異常，假陽(yáng)性率可達(dá) 8%-10%；而取樣 2 個(gè)細(xì)胞，若兩個(gè)細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果一致，準(zhǔn)確性可提升至 92% 以上，但需注意避免過(guò)度取樣 —— 卵裂期胚胎僅 8-10 個(gè)細(xì)胞，若取樣超過(guò) 2 個(gè)，會(huì)導(dǎo)致胚胎剩余細(xì)胞數(shù)量不足，影響后續(xù)發(fā)育，著床率可能下降 15%-20%。

囊胚期取樣細(xì)胞數(shù)量的選擇同樣關(guān)鍵。目前臨床多采用取樣 5-8 個(gè)滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞的方案，這一數(shù)量既能保證檢測(cè)所需的 DNA 量（單基因檢測(cè)需至少 3 個(gè)細(xì)胞的 DNA，染色體檢測(cè)需至少 5 個(gè)細(xì)胞的 DNA），又不會(huì)破壞滋養(yǎng)外胚層結(jié)構(gòu)。若取樣不足 3 個(gè)細(xì)胞，可能因 DNA 量不夠?qū)е聶z測(cè)失敗，需重新活檢，而重復(fù)活檢會(huì)進(jìn)一步增加胚胎損傷風(fēng)險(xiǎn)；若取樣超過(guò) 10 個(gè)細(xì)胞，會(huì)導(dǎo)致滋養(yǎng)外胚層完整性受損，影響胎盤形成，美國(guó)生殖醫(yī)學(xué)學(xué)會(huì)（ASRM）數(shù)據(jù)顯示，取樣 10 個(gè)以上細(xì)胞的囊胚，著床后早期流產(chǎn)率比取樣 5-8 個(gè)細(xì)胞的囊胚高 12%-15%。

值得注意的是，取樣時(shí)機(jī)和細(xì)胞數(shù)量的影響還與 PGT 檢測(cè)技術(shù)類型相關(guān)。對(duì)于染色體數(shù)目檢測(cè)（PGT-A），囊胚期取樣 5-8 個(gè)細(xì)胞的準(zhǔn)確性最高，假陽(yáng)性率約 3%-5%，假陰性率約 2%-4%；而卵裂期取樣 2 個(gè)細(xì)胞的假陽(yáng)性率約 7%-9%，假陰性率約 5%-6%。對(duì)于單基因疾病檢測(cè)（PGT-M），因需精準(zhǔn)分析特定基因位點(diǎn)，對(duì)細(xì)胞數(shù)量要求更高，通常需取樣 5 個(gè)以上細(xì)胞，若取樣不足，可能因等位基因脫扣（即某一基因位點(diǎn)未被檢測(cè)到）導(dǎo)致假陰性，發(fā)生率約 4%-6%。

面對(duì)這些影響因素，目前臨床已形成一系列優(yōu)化方案。例如，對(duì)卵裂期胚胎活檢，優(yōu)先選擇碎片比例低于 10% 的胚胎，且取樣 2 個(gè)細(xì)胞以提高準(zhǔn)確性；對(duì)囊胚期胚胎，采用激光輔助活檢技術(shù)縮短操作時(shí)間，將體外暴露時(shí)間控制在 5 分鐘內(nèi)；同時(shí)，根據(jù)檢測(cè)類型調(diào)整取樣數(shù)量 ——PGT-A 檢測(cè)取樣 5 個(gè)細(xì)胞，PGT-M 檢測(cè)取樣 6-8 個(gè)細(xì)胞。此外，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，如全基因組擴(kuò)增技術(shù)（WGA）的優(yōu)化，即使取樣 3 個(gè)細(xì)胞，也能通過(guò)高效擴(kuò)增獲取足量 DNA，減少因細(xì)胞數(shù)量不足導(dǎo)致的檢測(cè)失敗。

取樣時(shí)機(jī)和細(xì)胞數(shù)量作為胚胎活檢的核心細(xì)節(jié)，確實(shí)會(huì)從樣本代表性、檢測(cè)可行性和胚胎安全性三個(gè)方面影響 PGT 檢測(cè)結(jié)果。但通過(guò)科學(xué)選擇活檢階段、合理控制取樣數(shù)量，并結(jié)合先進(jìn)的檢測(cè)技術(shù)，可將這些影響降至最低。未來(lái)，隨著無(wú)創(chuàng)胚胎檢測(cè)技術(shù)的研發(fā)（如通過(guò)胚胎培養(yǎng)液中的游離 DNA 進(jìn)行檢測(cè)，無(wú)需活檢），或許能徹底解決取樣相關(guān)的準(zhǔn)確性問(wèn)題，但在當(dāng)前技術(shù)階段，精準(zhǔn)把控活檢細(xì)節(jié)仍是保障 PGT 檢測(cè)質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

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